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不同稀释液对大约克夏猪精液保存效果的影响

2015-05-07 11:17 字体:   打印 收藏 

摘要

      本研究主要是通过使用两种精液稀释液对精液进行稀释后,对稀释后进行常温保存的精液品质进行比较。精液四个小时观察一次,数出某一视野中呈直线前进运动的精子数、活精子数以及精子总数,为计算精子存活率及精子活率作准备。结果使用稀释液1的精子在保存128小时后全部死亡,80小时时精子活率为0.5;使用稀释液2的精子在116小时后全部死亡,精子活率在72h时为0.5。使用稀释液1稀释后的精液品质较好。
[关键词]稀释液;精液;精子活率;精子存活率;
 

Abstrat

The main purpose of this study is to dilute the semen by using two kinds of semen dilution, compared with semen quality after dilution were stored at room temperature. Observing the semen for every four hours, to count the number of straight movement sperm, live sperm and sperm counts, preparing for the calculation of sperm survival rate and sperm motility. Results using dilution 1 sperm all died in the preservation of 128 hours, 80 hours of sperm motility is 0.5; the use of diluted with 2 sperm all died in 116 hours, sperm motility in 72h 0.5. The quality of diluted semen 1 is better than diluted semen 2.
 
Keywords: Dilution, Semen, Sperm motility, Sperm survival rate

 
1 前言
猪的人工授精技术在我国20世纪60年代就已开展,人工授精技术的应用不仅可提高优良公猪的利用率,改善商品猪的质量,提高母猪的受胎率和产仔数,而且可以降低生产成本,减少生殖道疾病的传播,从而提高养猪生产的经济效益[1]。在1956年,全国开始推广猪的人工授精技术[2]。经过1年多的实践,一些良种猪场取得理想的繁殖效果,人工授精情期妊娠率达90%以上,母猪分娩率达86%,之后猪人工授精工作在全国得到全面推广[3]。随着规模化养猪场和动物繁殖技术的不断发展,人工授精技术的不断发展,人工授精技术在养猪业的应用力度也不断加大,但情期受胎率和产仔数依然较低是该项技术的不足。而采用人工授精技术后,母猪产仔数的多少与稀释液的配方有直接的关系[4]。因此,为了更加广泛有效的开展猪的人工授精,精液的稀释保存是关键技术[5]。目前,公猪精液常温保存在生产中具有一定的实用价值,便于长途运输和继续使用,亦扩大良种公猪的配种范围[6-7]。为了探讨一种在生产中使用方便、效果较好的猪精液常温保存稀释液,本试验从不同的精液稀释液着手,通过比较精子存活率和精子活率分析了精液稀释液与精液保存效果之间的关系。
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1精液
在种公猪站挑选健康、生产性能优良、体质健壮和遗产性能稳定的原种大约克夏猪1头,16月龄,用手握法采精,舍去前段透明的精液和精浆只收取乳白色的部分。采精后立即回到实验室,选取精子活率0.8以上、气味、色泽正常的精液供稀释保存用。
2.1.2 主要仪器
数码液晶一体显微镜、恒温冰箱、恒温水浴锅、电子天平、载玻片、盖玻片、贮精瓶、温度计、计数器、烧杯、玻璃棒
2.1.3 稀释液的配制
由多个种公猪场所用稀释粉中挑选出的性能较稳定、使用效果较好、价格相对比较低的2种商品化的稀释粉进行实验。在后续的分析中,将其标记为1号和2号稀释液(1号稀释液主要成分为葡萄糖、EDTA、KCL、NaHCO3、柠檬酸钠、抗生素等,2号稀释液的主要成分为右旋糖、三羟甲基氨基甲烷、AMK等)。使用之前,按照说明书,将稀释粉按比例用1000毫升的双蒸水稀释,用玻璃棒搅拌均匀,并用水浴锅加热至与精液等温,以备使用。
2.2 方法
2.2.1 实验设计
将所选出的两种商品化的稀释粉按照说明书用双蒸水稀释,并用玻璃棒搅匀,用水浴锅加热至与原精液相同的温度。将所采集的精液分为两等分,按照比例将稀释液与每一份精液混合均匀,测定稀释后的精子活率,每4个小时在显微镜下检测一次精子活力和精子存活率,直至精子全部死亡。通过所得数据分析不同稀释液对大约克夏猪精液常温保存的效果,以期获得大约克夏猪精液常温保存效果最佳的稀释剂。
2.2.2 精液的稀释和分装 
精液采集回来后,先在电子天平上称重再将精液分为两等分,对精液的密度进行初步观察,用玻璃棒蘸取精液至于载玻片上,放大显微镜下观察,采用目测法精子密度为密时,即可为实验所用。测量精液温度,在用与其等温的稀释液进行稀释,轻轻摇晃均匀。将稀释好的精液倒入准备好的精液保存瓶中,将空气排尽后拧紧瓶盖贴上标签,待精液达到室温后,将其放入恒温箱中保存。
2.3 指标的检测
2.3.1 精子存活率
   精子存活率是指在所观察的视野中活精子数占全部精子的百分比。精子存活率的测定采用目测法,即在观察的视野中用计数器记下活精子数,再加上死精子数即为全部精子数。从恒温箱中将稀释好的精液拿出来,用玻璃棒蘸取精液滴在载玻片上,盖上盖玻片,在200-400倍数码液晶一体显微镜下观察。用计数器记录活精子数和全部精子数。
2.3.2 精子活率
精子活率的测定方法采用目测法。精子活率是指在所观察的视野中呈直线前进运动的精子数所占全部精子的百分比。从恒温箱中取出恒温保存的精液,用玻璃棒沾取适量精液置于载玻片上,盖上盖玻片后在200-400倍数码液晶一体显微镜下观察。检测视野中直线前进运动的精子数占总精子数的比例,即精子活率。
 
3 结果
3.1精子存活率的变化
由表1可知, 用稀释液1稀释的精液在132h后精子存活率变为0;用稀释液2稀释的精液在120小时候后精子存活率变为0。
表1 用不同稀释液稀释精液后精子存活率的变化

时间(h) 稀释液1 稀释液2
  活精子数 死精子数 精子存活率 活精子数 死精子数 精子存活率
0 470 20 96% 425 18 96%
4 425 18 96% 430 18 96%
8 407 21 95% 400 26 94%
12 398 22 95% 402 26 94%
16 256 19 93% 374 28 93%
20 378 33 92% 359 40 90%
24 324 36 90% 327 40 89%
28 267 30 90% 333 50 87%
32 284 42 87% 298 65 82%
36 179 29 86% 274 69 80%
40 281 62 82% 255 76 77%
44 264 70 79% 267 104 72%
48 212 69 76% 318 143 69%
52 105 35 75% 224 121 65%
56 223 87 72% 218 134 62%
60 207 89 70% 190 132 59%
64 198 93 68% 156 133 54%
68 169 91 65% 197 182 52%
72 154 103 60% 156 150 51%
76 172 141 55% 154 167 48%
80 155 149 51% 123 170 42%
84 103 116 47% 114 171 40%
88 142 196 42% 108 169 39%
92 151 232 41% 100 186 35%
96 107 167 39% 89 189 32%
100 98 174 36% 76 195 28%
104 54 115 32% 54 191 22%
108 79 237 25% 31 151 17%
112 68 215 24% 14 142 9%
116 42 149 22% 2 65 3%
120 31 141 18% 0 147 0%
124 19 252 7% - - -
128 7 343 2% - - -
132 0 126 0% - - -
3.2 精子活率的变化
由表2可以看出, 稀释液1稀释的精液在84h后精子活率下降到0.5以下,在132小时精子活率为0;稀释液2稀释的精液在76h后精子活率下降到0.5以下,116小时精子活率为0。
表2 不同稀释液稀释精液后精子活率的变化

时间(h) 稀释液1 稀释液2
  直线前进运动精子数 精子总数 精子活率 直线前进运动精子数 精子总数 精子活率
           
0 441 490 0.9 399 443 0.9
4 403 443 0.9 399 448 0.8
8 385 428 0.9 362 426 0.8
12 378 420 0.9 342 428 0.8
16 245 262 0.8 318 402 0.7
20 358 411 0.8 307 399 0.7
24 302 345 0.8 245 367 0.7
28 219 297 0.8 240 383 0.7
32 227 326 0.8 209 363 0.7
36 141 208 0.7 189 343 0.6
40 216 343 0.7 173 336 0.6
44 198 334 0.7 179 371 0.6
48 155 281 0.7 207 461 0.6
52 75 140 0.7 139 345 0.6
56 154 310 0.6 129 342 0.5
60 135 296 0.6 108 322 0.5
64 119 291 0.6 86 289 0.5
68 86 260 0.5 104 379 0.5
72 80 257 0.5 81 306 0.5
76 89 313 0.5 75 321 0.4
80 79 304 0.5 55 273 0.4
84 50 219 0.4 49 285 0.4
88 70 338 0.4 44 277 0.4
92 138 383 0.4 35 286 0.3
96 47 274 0.4 28 278 0.3
100 42 272 0.4 23 271 0.3
104 21 169 0.3 15 245 0.2
108 30 316 0.3 7 182 0.2
112 25 283 0.3 3 156 0.1
116 11 191 0.2 0 67 0
120 8 172 0.2 - - -
124 5 271 0.2 - - -
128 1 350 0.1 - - -
132 0 126 0 - - -
 
3.3  结果分析
试验过程中共采取精液180毫升,精液呈乳白色,具有微腥味,在电子显微镜下肉眼观察精子密度均为密。在观察时间内精子存活率的变化由表1可观察到,用稀释液1稀释的精液在132h后精子存活率变为0;用稀释液2稀释的精液在120小时候后精子存活率变为0。在不同时段精子活率的变化从2可观测到,使用稀释液1稀释的精液,在所观测的80小时内,精子活率均在0.5以上;而使用稀释液2稀释的精液,在68小时内精子活率在0.5以上。可见,稀释液1的效果比稀释液2的效果好。
4 讨论
稀释剂是影响猪常温精液产品质量与成本的主要因素之一[6]。本实验通过比较两种稀释粉稀释精液后精子存活率和精子活率,得出稀释粉1的效果比稀释粉2的效果好的结论。从精子存活率比较,稀释液1的存活时间可达128小时,稀释液2的存活时间为116小时;张海涛等的实验也得出过最优秀稀释液精子存活时间达到120小时的结论[7]。从精子活率比较,稀释液1精子保持正常受精能力的时间为80小时,稀释液2保持正常受精能力的时间为72小时。
精液常温保存较长时间有助于人工授精技术的推广,对于中小型猪场或个体养殖户,可节省种公猪的饲养管理成本,也有助于良种的推广[8]。在稀释精液时,稀释液温度必须与精液温度一致,以避免精子的冷应激;精液最好保存在17℃的恒温箱中,以避免温度对精子活率的影响;采精时精清与胶体物质应去除,尽量采取乳白色的精液部分,避免污染,猪精液中含有各种营养物质,常温体外保存时极利于微生物的生长繁殖[9-10]。茆达干[11]等研究表明,若精液被细菌污染,其保存效果因细菌种类和数量的不同而异,大肠杆菌等对精液影响极大,可在短时间内使精子活率、顶体完整率、PH值大幅度下降。所以在实验操作过程中要避免其受到污染。
根据本实验的结果,精液并没有如说明书上所标记的可以保存3至5天,一般在第三天就已经不具有受精能力了,所以再此提醒广大用户稀释后的精液应尽快使用,最好在三天前使用。
参考文献
[1] 张守全, 吴同山, 李炳坤, 等. 人工授精与本交对引进品种母猪繁殖表现的影响[J]. 养猪, 1999,
(4):14-15.
[2] 张守全. 美国猪人工授精技术应用现状及启示[J]. 黑龙江动物繁殖, 1998,
6( 2) : 41 - 44.
[3] 金从福,保国,郭仁龙,等. 猪人工授精的发展与优点[J]. 畜禽业, 2010,
25( 9) : 55.
[4] 陈清森, 陈瑶生, 张豪, 等. 季节、品种对猪精液性状的影响分析[J]. 养猪业, 2005,
(6): 8- 11.
[5] 孙德林, 吕小燕. 不同品种不同月龄公猪精液的比较研究[J]. 动物科学与动物医学, 2005,
(2): 58- 59.
[6] 孙德林,吕晓艳,王楚端.不同配方稀释粉对公猪鲜精保存的效果分析[J].动物科学与动物医学,2004,
21(12):43-45.
[7] 张海涛.常温保存猪精液稀释液的筛选实验[J].畜牧与饲料科学2011,
32(1):32-33
[8] 张忠诚.家畜繁殖学[M].4版.北京:中国农业出版社,2005,
71-73.
[9] 汤孝禄. 大型猪场人工授精技术应用实践[J]. 养猪, 2005,
(1):15- 16.
[10] Rothschild M F. Genetics and reproduction in the pig. Animal Reproduction Science (Netherlands).
1996 (1): 143~151
[11] 茆达干,杨利国,王元兴. 不同稀释液对猪精液常温保存效果的研究[J]. 畜牧兽医杂志,2002,
21( 1) : 3 - 7.



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